Прополис вырабатывается пчелами из смолистых веществ растительного происхождения, собираемых ими с древесных почек, молодых веток и листьев осины, ивы, каштана и других деревьев, а также с некоторых травянистых растений. Главные источники прополиса — береза и тополь, но кроме них пчелы собирают прополис также со стволов и шишек сосны и в виде обножек приносят в улей. Растения, с которых берутся смолистые вещества прополиса, обладают бактерицидными свойствами. Основную массу прополиса пчелы получают из оболочек цветочной пыльцы, пропитанной смолистым веществом — бальзамом, являющимся раствором смолы в эфирном масле. Бальзам предохраняет содержимое пыльцевых клеток от неблагоприятных внешних условий, в том числе от чрезмерного увлажнения.

Главный сбор прополиса происходит в конце лета и осенью, и очень редко — весной. Склонность у разных пород пчел к сбору прополиса неодинакова. Много прополиса собирают пчелы серой горной кавказской и среднерусской породы, намного меньше — украинской, слабо выражена эта склонность у итальянских пчел, а индийские пчелы — Apis indica, А. florea и A. dorsata, вообще не собирают пчелиного клея.